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    不規則抗體篩檢卡標準操作程序
    來源:博迅生物    發布時間:2009年11月21日

    一、 準備工作

        (一)微柱凝膠試劑卡的準備:觀察外觀,如有干膠、雜質、氣泡不可使用,之后將卡放置室溫

              (18~25℃)平衡,再用專用離心機離心5分鐘。

        (二)檢測標本的準備:

          1.紅細胞懸液的制備:將篩檢紅細胞或譜細胞配成0.8%濃度的懸液。

          2.血清標本的制備:采集被檢對象靜脈血,放入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中,10分鐘后離心,取上

              清;或者靜脈血采入無抗凝劑試管中,4℃放    置 12小時,或37℃放置2小時后離心,2000r/min,10

              分鐘,取上清(該上清不得有絮狀物或沉淀)。

    二、操作步驟

    1. 將準備好的不規則抗體篩檢卡做好標記;

    2. 將配好的篩檢細胞或譜細胞懸液加入標好的微管中,各一滴(或50μl);

    3. 分別立即加入被檢者血清1滴(或50μl);

    4. 加樣后的試劑卡,置37℃孵育器中孵育15分鐘;

    5. 使用專用離心機離心5分鐘(900rpm2分鐘,1500 rpm3分鐘),取出肉眼觀察結果。

    結果判定:根據所提供的篩檢紅細胞或譜細胞的反應格局來判定結果

    例:按Ⅰ(-)、Ⅱ(4+)、Ⅲ(-)的實驗結果及提供如下的篩檢紅細胞反應格局來分析

    篩檢細胞反應格局

    編號
    Rh-hr
    Kidd
    MNS
    Duffy
    Diego
    Kell
    Lewis
    P
    D
    C
    E
    c
    e
    Jka
    Jkb
    M
    N
    S
    s
    Fya
    Fyb
    Dia
    K
    k
    Lea
    Leb
    p1
    I
    +
    +
    -
    -
    +
    +
    +
    +
    -
    -
    +
    +
    -
    -
    -
    +
    +
    -
    +
    II
    +
    -
    +
    +
    -
    +
    +
    -
    +
    -
    +
    +
    -
    -
    -
    +
    -
    +
    +
    III
    +
    +
    -
    +
    +
    +
    +
    +
    -
    -
    +
    +
    +
    -
    -
    +
    -
    +
    -

    陰性結果用排除法,陽性結果用可能包含法。

    以前五種抗原為例:

    Ⅰ(-): 可排除D、C、e;

    Ⅱ(4+):判斷可能含有D、E、c;

    Ⅲ(-): 可排除D、C、c、e;

    綜上,可認為:此樣品血清中可能含有-E

    三、 注意事項

       1.應用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫試驗檢測病人紅細胞時,一定要用適量EDTA的試管采血液標本,該標

          本不能放入4℃-10℃冰箱保存,以避免紅細胞在病人體外致敏所致假陽性反應。

       2.紅細胞標本一定不能被細菌污染,否則出現假陽性反應。盡可能應用當日采集的新鮮血做本試驗。如不

          得不用過夜血或陳舊血,則必須首先用該標本做陰性對照試驗,以確定該標本是否可以做本實驗。

       3.血清標本:血清標本必須充分去纖維蛋白,否則標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出,阻礙陰性紅細胞沉

          淀,呈假陽性反應。

       4.如在微柱凝膠管中出現溶血現象,強烈提示為紅細胞抗原抗體陽性反應,也不排除其他原因所致溶血,

          故對此標本一定認真分析,并向上級主管技術人員報告并討論其原因。

       5.每日試驗前,先取出微柱凝膠卡放置至室溫。

       6.試劑卡應放在18-25℃儲存,如若長期放在4℃冰箱,建議每1-2個月取出,用專用離心機離心一次,

          防止干膠或產生氣泡。

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