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    新生兒溶血病母體IgG抗體效價檢測卡標準操作程序
    來源:博迅生物    發布時間:2009年11月21日

    一、準備工作

    (一)微柱凝膠試劑卡的準備:觀察外觀,如有干膠、雜質、氣泡不可使用,之后將卡放置室溫(1825℃)平

          衡,再用專用離心機離心5分鐘。

    (二)試劑配制:吸取2-Me14.7μl,加pH7.4磷酸鹽緩沖液至1ml為0.2M 2-Me應用液;或用100ml pH7.4的PBS溶

          解0.154g二硫蘇糖醇,即0.01M DTT;密閉,避光,保存于4℃冰箱內,可使用1個月。

    (三)標本采集:抽取孕婦靜脈血5ml,一般為不抗凝血,無需空腹。同時,提供3-4ml胎兒父親的抗凝血,對判

          斷母子血型的配合與否是十分有益的。

    (四)紅細胞標本的制備:用紅細胞稀釋液配制紅細胞懸液,紅細胞最終濃度為0.8%。

    (五)血清標本的制備:將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中,10分鐘后離心,取上清;或者將

          被檢者靜脈血采入無抗凝劑試管中,4放置12小時,或37放置2小時后離心,2000rpm,10分鐘,取上

          清。該上清不得有絮狀物或沉淀。取同體積的血清和2-Me(DTT)混勻,37℃孵育30~60分鐘。

    二、操作步驟

        1. 在試管中加入200ul母體血清和200ul 2-Me應用液(或DTT應用液),置37℃水浴3060分鐘,以充分破壞

           血清中的IgM類抗體。

        2. 取6只干凈試管,做好標記;第1管中加入處理后的血清50ul和350ul生理鹽水,混勻(為1:16稀釋);第

           2-6管中依次加200ul的生理鹽水和前一管中的血 清200ul,做倍比稀釋。

        3. 將卡標記好,依次將倍比稀釋后的相應50ul血清分別加入標記孔中。

        4. 在所有孔中加入50ul父親的0.8%紅細胞懸液(或與父親同型的A型或B型0.8%紅細胞懸液),測定孕婦ABO

           血型系統IgG血型抗體;在所有孔中加入50ul標準O型 0.8%紅細胞懸液,測定孕婦ABO血型系統以外IgG血

           型抗體。

        5. 加樣后的試劑卡,置37℃孵育器中孵育15分鐘。

        6. 用專用離心機離心5分鐘(900rpm 2分鐘,1500rpm 3分鐘), 取出,判定結果。 

    三、結果判定:產生1+凝集的最高稀釋度,其倒數即為效價

        1. 陽性結果:紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中。

        2. 陰性結果:紅細胞完全沉降到膠底部,在凝膠管底部形成紅細胞扣。

        注:據文獻報道卡式抗人球蛋白法測出的母體效價值比聚凝胺和抗人球蛋白試管法高出1-2個滴度。

    四、注意事項

        1. 紅細胞標本一定不能被細菌污染,否則出現假陽性反應。盡可能應用當日采集的新鮮血做本實驗。如

           得不用過夜血或陳舊血,則必須首先用該標本做陰性對照試驗,以確定該標本是否可以做本實驗。

        2. 血清標本:血清標本必須充分去除纖維蛋白,否則標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出,阻礙紅細胞沉

           淀,呈假陽性反應。

        3. 如在微柱凝膠中出現溶血現象,強烈提示為紅細胞抗原抗體陽性反應,也不排除其他原因所致溶血,

           故對此標本一定認真分析,并向上級主管技術人員報告并討論。

       4. 父親紅細胞標本也可用與其同型的A型或B型紅細胞代替。

       5. 每日試驗前,先取出微柱凝膠卡放置至室溫。

        6. 試劑卡應放在18-25℃儲存,如若長期放在4℃冰箱,建議每1-2個月取出,用專用離心機離心一次,

           以防止干膠或產生氣泡。

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