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    ABO、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體)標準操作程序
    來源:博迅生物    發布時間:2009年11月21日

    一、準備工作

    (一)微柱凝膠試劑卡的準備:觀察外觀,如有干膠、雜質、氣泡不可使用,之后將卡放置室溫(1825℃)平

           衡,再用專用離心機離心5分鐘。

    (二)檢測標本的準備:

    1.紅細胞懸液的制備:取被檢者壓積紅細胞10微升,加入1.01.2毫升紅細胞稀釋液,外觀應為均勻淡紅

       色,無絮狀物和血塊。

    2.血清標本的制備:采集被檢對象靜脈血,放入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中,10分鐘后離心,取上清;

       或者靜脈血采入無抗凝劑試管中,4℃放置 12小時,或37℃放置2小時后離心,2000r/min,10分鐘,取上清

      (該上清不得有絮狀物或沉淀)。

    二、操作步驟

          1. 將準備好的ABO.RhD血型定型試劑卡做好標記。

           2. 將待檢者紅細胞懸液分別加入第1至第4管中,每管50ul。

    3. 將待檢者血清分別加入第5和第6管中,每管50ul。

    4. 將已知的A型和B型紅細胞0.8%濃度懸液或0.8%濃度ABO血型反定型紅細胞試劑,每管50ul分別加入第5和

       第6管。

    5. 即刻使用專用離心機離心5分鐘(900rpm2分鐘,1500rpm3分鐘),取出肉眼判定結果。

    結果判定:

    陽性結果:紅細胞抗原與相應抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復合物浮在凝膠表面或膠中,為陽性反應。

    陰性結果:被檢紅細胞抗原無相應的抗體結合,不出現特異性抗原抗體復合物,紅細胞沉于微柱凝膠的尖底部。

    血型判定: 

    血型

    A

    B

    D

    陰性對照

    A細胞

    B細胞

    D

    A

    +

    +

    +

    B

     

    +

    +

    +

    O

    +

    +

    +

    AB

    +

    +

    +

     D

    A

    +

    +

    B

    +

    +

    O

    +

    +

    AB

    +

    +

    三、注意事項

    1檢測標本必須為抗凝血。

    2紅細胞標本一定不能被細菌污染,否則出現假陽性反應。盡可能應用當日采集的新鮮血做本試驗。如

       得不用過夜血或陳舊血,則必須首先用該標本做陰性對照試驗,以確定該標本是否可以做本實驗。

    3. 血清標本:血清標本必須充分去纖維蛋白,否則標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出,阻礙陰性紅細胞

       淀,呈假陽性反應。

    4如在微柱凝膠管中出現溶血現象,強烈提示為紅細胞抗原抗體陽性反應,也不排除其他原因所致溶血,

       故對此標本一定認真分析,并向上級主管技術人員報告并討論。

    5若結果為±1需進一步分析,可能為亞型或弱化抗原。

    6每日實驗前,先取出微柱凝膠卡放置一段時間至室溫,以防冷凝集。

    7. 試劑卡應放在18-25℃儲存,如若長期放在4℃冰箱,建議每1-2個月取出,用專用離心機離心一次,

       防止干膠或產生氣泡。

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